产品目录

BL21(DE3)pLysS菌株是收集生长在对数期的BL21(DE3)pLysS菌，加入含有甘油的细菌冻存液制备而成。可以直接划平板或小量、大量培养。本菌株适用于T7启动子调控目的基因表达的pET系列等原核表达质粒，特别适合于影响细菌生存和活力的外源毒性蛋白的IPTG诱导表达。本菌株可以使用常规的LB培养基或SOC培养基进行培养。

BL21缺失细胞质中的Lon蛋白酶和胞外膜上的OmpT蛋白酶，能有效避免重组表达蛋白的降解，所以被广泛用作外源蛋白的表达菌株。

BL21(DE3)是BL21被λ噬菌体DE3溶原化的衍生菌株，在lacUV5启动子控制下可表达噬菌体T7 RNA聚合酶(相关基因序列已经整合到细菌染色体中)。IPTG可以诱导BL21(DE3)菌株中T7 RNA聚合酶的高表达，因此BL21(DE3)菌株适合受T7启动子调控的目的基因通过IPTG诱导表达。常见的pET系列原核表达载体中目的基因的表达都是受T7启动子调控的，因此都适合用BL21(DE3)作为宿主菌。

BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性，可以表达能降解T7 RNA聚合酶的T7溶菌酶(T7 lysozyme)，从而可以抑制T7 RNA聚合酶在目的蛋白被IPTG诱导前的本底表达，即导致本底性的外源重组蛋白的表达被有效抑制。因此本菌株特别适合于影响细胞生存和活力的外源毒性蛋白的表达。

• 划平板接种：
  取出BL21(DE3)pLysS菌株置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。
  
  • 用镊子和塑料枪头操作：镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的200μL塑料枪头，蘸取少量BL21(DE3)pLysS菌株，然后把蘸有菌液的塑料枪头，以尽量和LB平板(含有34μg/mL氯霉素)接近平行的角度，在LB平板上连续作S形或Z形划动，再用一无菌的200μL塑料枪头，在原先的划线上以90°或120°角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常换枪头重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
    
  • 用接种环操作：将接种环在酒精灯上略略烧一下，使接种环处于无菌状态。微冷后，蘸取少量BL21(DE3)pLysS菌株，在LB平板(含有34μg/mL氯霉素)上连续作S形或Z形划动。把接种环再烧一下，微冷后，在原先的划线上以90°或120°角，再在LB平板上连续作S形或Z形划动。通常用接种环重复操作2～3次即可。37℃倒置培养过夜。
• 直接培养：
  取出BL21(DE3)pLysS菌株置于冰上，并置于超净台内，后续操作都在超净台内操作。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并且在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，蘸取少量BL21(DE3)pLysS菌株，然后把蘸有菌液的塑料枪头或牙签放到装有3mL LB(含有34μg/mL氯霉素)的细菌培养试管内或装有100mL或更大体积LB(含有34μg/mL氯霉素)的细菌培养瓶内。37℃，约200rpm培养过夜。

• BL21(DE3)pLysS菌株核酸酶表达水平较高，在利用其进行被转化质粒提取时，为充分避免核酸酶的影响，可使用通用型质粒小量提取试剂盒(3mL)、通用型质粒中量提取试剂盒(9mL)或通用型质粒大量抽提试剂盒(100mL)进行质粒抽提。
  
• 感受态细菌的制备可以使用感受态细胞快速制备试剂盒、高效感受态细胞制备试剂盒或其它方法进行感受态细胞。